国内三代测序技术瞄准遗传病诊断

在过去的2016年，第三代测序获得了完美突破，首次登上了太空，首次完成人类基因组测序，首次确定了二代测序未能检测到的致病性大片段缺失突变，最终确诊了一种罕见遗传病......第三代测序也被Science纳入2016年十大科学突破之一。

第三代测序技术避免了第二代测序读长短的缺点，在临床上具有无需PCR扩增、可直接对单个分子进行测序、样本制备简单、可直接读取RNA序列和包括甲基化在内的DNA修饰等显著优势，近年来逐渐被应用到各大研究中，在人类基因组研究中也获得了重大突破。未来几年随着三代测序技术性能的提升，成本还有进一步下降的空间，对于测序深度的选择会更加灵活。

PacBio确定致病性结构变异极具潜质

PacBio单分子实时测序是当前应用较为广泛的第三代测序平台之一，它具有超长读长、不需要模板扩增、运行时间较短、直接检测表观修饰位点、较高的随机测序错误等特点。2016年，PacBio Sequel系统在确定致病性结构变异上展现出了巨大的潜质。

BioRxiv上的文章显示，西班牙裔男性患有Carney 综合征，但临床单基因检测和全基因组测序结果均为阴性。研究人员利用 PacBio Sequel系统进行了低覆盖度的全基因组测序，共发现了大于50bp的6971个缺失片段和6821个插入片段，通过排查，最终确定了PRKAR1A基因外显子的2184bp杂合子缺失，该基因也正是Carney综合征的致病基因。

目前PacBio单分子实时测序技术已应用在基因组组装、转录组测序、甲基化分析和基因组重测序等方面，尤其是在基因组组装和甲基化研究中有着独特的优势。

2016年6月份，Nature Communications杂志发表了第一个亚洲人参考基因组“华夏一号”。该项目由暨南大学粤港澳中枢神经再生研究院主导，南加州大学等多家单位共同合作完成。在该项目中，研究人员利用PacBio公司的SMRT（ Single Molecule, Real Time）三代测序技术，结合BioNano光学图谱分析技术，完成了第一个参考序列级别的亚洲人基因组图谱，对于中国人群基因组学研究、遗传疾病研究、精准医疗应用等领域具有重要科学及临床价值。

2016年10月份，Nature杂志上的研究显示，国立首尔大学医学院的研究人员运用第三代测序PacBio单分子实时测序技术、GemCodeTM和BioNano等多个平台，对一名韩国人的基因组（AK1）进行从头组装和单倍体型定相信息分析。这是迄今为止发表的最为连续的人类基因组组装，填补了特异人群参考基因组的空白，并确定了结构变异。

第三代测序助力遗传病诊断

第三代测序技术极大地降低了测序的成本和速度，也越来越得到行业的认可。基因测序是实现精准医疗的有力武器，目前单分子测序平台可以广泛应用于无创产前诊断、肿瘤早期无创诊断、胚胎植入前遗传学筛查、病原体检测和遗传病基因变异检测等。随着技术的发展，2016年第三代测序技术诊断遗传病初显成效，国内从事第三代测序的企业也开始做进一步布局，希望能够全面开启第三代测序技术在精准医学领域的创新应用。